碧云天Beyotime BeyoMag™基因组DNA小量抽提试剂盒通用型, 磁珠法

  碧云天生产的BeyoMag™基因组DNA小量抽提kit(通用型, 磁珠法)，即BeyoMag™ Universal Genomic DNA Purification Mini Kit with Magnetic Beads)是一种基于磁珠法的便捷的基因组DNA抽提kit。本产品可以用于抽提动物tissue、鼠尾、培养细胞、bacteria、酵母、动物血液、昆虫以及固定tissue的包括基因组DNA在内的总DNA，也可以用于长度大于100bp 基因片段的抽提。本kit通过说明书中提供的不同操作方法，可以抽提除植物样品外的几乎所有样品中的总DNA。

本kit的原理和操作流程如图1所示。样品首先被蛋白酶K消化，释放出来的基因组DNA在特定条件下与磁珠特异性结合。在外界磁场(如磁分离架)的作用下，磁珠与相应溶液可以便捷地分离。随后通过两次洗涤去除各种杂质，通过洗脱液将DNA从磁珠上洗脱下来[1-3]。整个过程*氯抽提，*沉淀，样品裂解后需约15分钟即可完成。

图1. BeyoMag™基因组DNA小量抽提kit(通用型, 磁珠法) (D0088)抽提DNA原理示意图。

通过本kit纯化得到的基因组DNA的长度平均为30kb左右，100bp-50kb之间的DNA可以被纯化。如需获得更长的基因组DNA，对于哺乳动物样品，包括tissue或细胞等，可以使用碧云天哺乳动物基因组DNA抽提kit(D0061)。

通过本kit获得的总DNA，OD260/OD280的范围通常在1.6至1.9之间。

本kit按照推荐的操作步骤，每次可抽提少至数百个细胞，多至25mgtissue、0.5-1cm鼠尾、500万个培养细胞、20亿个bacteria或5000万个酵母。样品用量过多，反而会影响抽提效果。如果待抽提样品的DNA含量小于5ng，建议加入适当量的carrier DNA，例如poly-dT或其它对后续实验没有干扰的DNA，也可以加入适当量的carrier RNA，例如Yeast RNA (R0038/R0040)等，以改善抽提效果。本kit与基因组DNA小量抽提kit(通用型，离心柱式) (D0063)的抽提效果对比参见图2。如图2所示，本kit用于抽提细胞和tissue样品的DNA时，抽提得到的DNA的量与碧云天的离心柱式kit相当。

图2. 碧云天BeyoMag™基因组DNA小量抽提kit(通用型, 磁珠法) (D0088)和基因组DNA小量抽提kit(通用型, 离心柱式) (D0063)用于从HEK293T细胞和小鼠tissue抽提基因组DNA的效果图。图A使用两款kit分别抽提100万HEK293T细胞的总DNA，图B使用两款kit分别抽提小鼠tissue肝脏、脑和肌肉)的总DNA，洗脱液用量均为50μl，取8μl洗脱后的样品混合1.6μl BeyoRed DNA上样缓冲液(6X) (D0072)，使用0.8%琼脂糖凝胶进行电泳检测。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果供参考。

按照本kit的标准操作步骤抽提得到的总DNA会含有少量的RNA，但如果按照可选步骤加入适量的DNase free的RNase A (ST576/ST577)，就可以获得不含RNA的高纯度总DNA。含有RNA的总DNA可以用于PCR，但对于某些其它的后续反应可能会产生一些影响。

本kit中的BeyoMag™磁珠，每20µl磁珠悬液对于DNA的比较大结合容量约为30μg。通常每200万HeLa细胞或500万淋巴细胞可以抽提得到15-25μg总DNA，每25mg肝、脑、肾tissue可以抽提得到10-30μg总DNA，每25mg心、肺tissue可以抽提得到5-10μg总DNA，每10mg脾tissue可以抽提得到5-30μg总DNA，每1.2cm小鼠尾尖或0.3cm大鼠尾尖可以获得10-25μg总DNA。

本kit小包装可以抽提50个样品的总DNA。

包装清单：

保存条件：

蛋白酶K -20℃保存，其余均室温保存。保质期一年。其中BeyoMag™磁珠长期不使用时，可以4℃保存，4℃可以保存更长时间。蛋白酶K室温(15-25℃)存放一周，活力无明显下降。

注意事项：

需自备磁分离装置，推荐使用碧云天的1.5/2ml磁分离架(FMS004/FMS008/FMS012/FMS016/FMS024)。

抽提bacteria、酵母样品时还需要一些特定的试剂，详情请参考使用说明中的相关描述。

如需制备不含RNA的高纯度总DNA，需自备DNase free的RNase A，推荐订购碧云天的RNase A (ST576/ST577)。

温度较低时样品裂解液A或样品裂解液B中可能会有沉淀产生，属正常现象。使用前必须检查一遍。如有沉淀，55℃水浴孵育使沉淀溶解，混匀后使用。

初次使用前洗涤液I需添加7ml，洗涤液II需添加24ml，混匀，并在瓶上做好标记。

磁珠在静置后会发生沉降，使用**定要适当涡旋震荡或颠倒数次至充分混匀。

磁分离前应适度震荡离心管使磁珠充分分散后再靠近磁场。如果出现磁珠挂壁现象，可以在磁珠凝聚后晃动管内液体，使挂壁的磁珠流下。

请使用推荐的样品量。如果样品量过大，可能造成磁珠凝聚，会影响洗涤进而影响抽提获得的DNA纯度。发生磁珠凝聚时，洗涤时需尽量分散磁珠，这样可改善抽提效果。如果发生磁珠凝聚现象，建议在后续实验中适当减少样品用量。

本kit的某些步骤需使用55℃和70℃水浴，请提前作好准备。

除特别说明外，每次Vortex应保持在5-10秒左右。

本kit所有操作均在室温进行，操作时*冰浴。

参考如下使用说明，从某些样品中抽提总DNA不需要使用样品裂解液A。

本产品用于于从业人员的科学研究用，不得用于临床用途，不得用于其他用途，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。